【產(chǎn)品信息】

【產(chǎn)品簡介】

酪酰胺信號放大（TSA）系統(tǒng)可用于檢測熒光免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）、免疫組織化學(xué)（IHC）中的低豐度靶點，可將信號靈敏度提高100倍。TSA 熒光試劑盒使用辣根過氧化物酶（HRP）直接催化固定化酶周圍的熒光基團(tuán)共價沉積，形成永久性共價鍵結(jié)合。在運用HRP二抗及一抗在微波熱修復(fù)條件下脫離掉抗原失活的原理，重復(fù)此過程，即可實現(xiàn)同種屬熒光雙標(biāo)及熒光三標(biāo)以及多標(biāo)（注：此過程僅適用于石蠟切片的熒光多標(biāo)）。

此試劑盒中的熒光探針可單獨或配合使用。超敏型Flare熒光染料的亮度比普通型Flare熒光染料高10倍以上，不再需要增強劑輔助，即可獲得高亮度的熒光標(biāo)記。

【儲存與運輸】

冰袋（wet ice）運輸；4℃保存，有效期 12 個月。 

【使用方法】

1.脫蠟至水

依次將切片放入二甲苯 Ⅰ 8min→二甲苯 Ⅱ 8min→無水乙醇 Ⅰ 5min→無水乙醇 Ⅱ 5min→95%酒精 5min→85%酒精 5min→蒸餾水洗。

2.抗原修復(fù)（必須為抗原熱修復(fù)）

組織切片置于盛滿抗原修復(fù)緩沖液（PHxx）（貨號：HKI0001/0002/0003/0004）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。中火8min至沸騰后，斷電間隔8min，中低火7min至沸，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。（可自行摸索）

3.阻斷內(nèi)源性過氧化氫酶和血清封閉

切片加上過氧化物酶阻斷劑（貨號：HKI0047），室溫孵育25min，PBS洗滌后，在組化圈內(nèi)滴加封閉液（貨號：HKI0009R/B/S）均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。

4.加一抗、二抗

在切片上滴加用通用抗體稀釋液（貨號：HKW2083）按一定比例稀釋的一抗，切片平放于濕盒4℃過夜孵育。加二抗：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min（也可使用普通二抗，超敏二抗效果更佳）。

5.加TSA信號放大試劑

根據(jù)需要標(biāo)記的熒光顏色加對應(yīng)的TSA 放大試劑(Flare超敏濃縮型：超敏染料稀釋液=1:400)，孵育3-10min（具體根據(jù)預(yù)實驗條件確定）。如遇標(biāo)記效果差的可適當(dāng)調(diào)整熒光試劑稀釋比，正常孵育。

6. 重復(fù)抗原修復(fù)從步驟2可進(jìn)行多色標(biāo)記

7.DAPI復(fù)染細(xì)胞核

8.抗熒光淬滅劑封片

9.相應(yīng)熒光通道拍照或掃描

（注：上述1-8步驟之間，除血清封閉后不用清洗外，各步驟之間都需用純水或PBS充分浸洗）

【注意事項】

樣本來源為兔（或小鼠），若出現(xiàn)較高非特異性熒光著色，一抗為兔抗（或鼠抗）時，可采用POLY-HRP羊抗兔鼠通用二抗(貨號：HKI0029）或POLY-HRP羊抗鼠二抗（貨號：HKI0027）。